Hela/DDP细胞株筛选的方法
点击次数：1463 更新时间：2021-06-23
Hela/DDP细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了，细胞的生长就会出现停滞，大部分细胞衰老死亡。但是有极少数的细胞能够度过危机而继续传下去，这些存活的细胞一般能够传到40--50代，这种传代细胞叫做细胞株。
Hela/DDP细胞株筛选的方法：
单克隆环法筛选：
单克隆环法主要用于整合率低的转染法以及获得单克隆细胞株。单克隆环法具有工作量小的优点，只要把转染体细胞按一定的细胞密度放入新的培养皿，用合适的药物筛选并在培养皿中进行扩增，适合少量劳动力作业，其劣势可能难以获得高产率的稳定细胞株。
逆转录病毒的混合克隆技术筛选：
此法可用于制备稳定混合细胞株，其优点在于能在短时间内得到稳定的细胞株，且能在任何时候将细胞稀释成新的培养皿，倾向于整合靠近转录始端的位点的基因，容易激活下游基因，但同时这些整合到转录活性基因的基因很容易导致整合部位基因的插入失效，影响到克隆的纯度。高等细胞株中存在非整合细胞，这种混合细胞内的细胞稳定结合，不会失去生长的优势。
Hela/DDP细胞株培养步骤：
1、复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL*培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜，培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2、细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
