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SMMC7721/DDP细胞株商家为您介绍细胞处理方法

点击次数:1875 更新时间:2019-07-26
   SMMC7721/DDP细胞株特性:
  安全性:所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后,在倒置镜下是在4X物镜)观察整个细胞生长情况。
  (一)如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,换 10ml新鲜培养液后继续培养。
  (二)如果细胞已长满,即可进行传代培养。具体步骤操作如下:
  1. 弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。
  2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒放于37℃培养箱1-3分钟预热,之后翻转培养瓶10-30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量*培养基终止消化。
  3. 按6-8ml/瓶补加*培养基,轻轻打匀后吸出一半,分到新的培养瓶中。如果没有特别说明,收到细胞后的*次传代一般是一传二。
  人  注意事项:
  1、观察细胞在低倍镜(4或5X物镜)下进行,否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。
  2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基,细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。
  3、有些细胞贴壁不牢,如发现贴壁细胞有脱落,可离心吹打后接种到新瓶内。
  4、收到细胞后,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请及时与我们。
  下面,SMMC7721/DDP细胞株商家为您介绍细胞处理方法
  一.贴壁细胞
  客户接收到细胞,用75%的酒精消毒(建议配制75%酒精的水是灭菌过的)培养瓶外部。
  肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
  显微镜观察细胞,当细胞融汇至80%左右(可以传代的情况下),细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度,培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
  严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
  将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
  用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
  1000rpm,5min离心,重悬细胞。换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2  培养。
  二.悬浮细胞
  1. 接收到细胞,用75%的酒精消毒(建议配制75%酒精的水是灭菌过的)培养瓶外部。
  2. 肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张)。
  3. 严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
  4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒)。
  5. 1000rpm,5min离心,重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基,37℃,5%CO2  培养。
  三.一毫升小管操作方法  小管内也是此细胞。
  1. 用75%的酒精消毒(建议配制75%酒精的水是灭菌过的)。
  2. 严格无菌操作,用吸管吸出管中细胞至9ml*培养基混匀。
  3. 1000rpm,5min离心,重悬细胞。
  4.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2  培养。
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