一个好的L1210/DDP细胞株有多方面要求
点击次数：2242 更新时间：2017-11-27
在抗体药物开发过程中L1210/DDP细胞株开发是CMC的起点和基础，可以说CMC的大部分工作都是直接或间接与细胞株有关。药物上市以后一般情况下同一个细胞株将伴随产品的整个生命周期。 细胞株的好坏直接决定生产成本和产品质量，其重要性不言而喻。细胞株的构建从原理上来说十分简单，无非是把质粒转染到细胞里然后整合到宿主细胞的基因组。但是L1210/DDP细胞株的产量和质量千差万别，构建一个适合生产用的L1210/DDP细胞株并非是一件容易的事情。
一个好的L1210/DDP细胞株有多方面要求：
1.产量高，高的产量直接降低固定投资和单次生产成本。
2.产品质量符合要求。产品质量影响药效和安全性。
3.稳定性。产量和质量在生产传代过程中不应有大的改变。一般认为在60-90PDL产量变化不超过30%是可以接受的。
4.与生产过程的相容性。细胞株需要适合大规模生产放大。
5.合规。细胞株的构建过程应避免接触或使用动物来源成分或其它可能影响安全性的成分， 保证单克隆性（clonality）以及整个过程的实验记录完整。
做为一个细胞株开发平台，不仅仅需要能够开发出好的生产用高产细胞株，设计一个好的流程也很重要。
一个好的L1210/DDP细胞株开发平台需要满足：
1.可有效产生高产细胞株。
2.能够快速获得细胞株以缩短CMC时间，加快药物上临床的时间。
3.能够快速获得足量的重组蛋白以进行生产可行性研究及药物体内体外实验。
4.降低工作量。一方面降低人力成本，另一方面也降低人为操作失误的可能性。
建一个好的细胞株重要，如何建好的细胞株同样重要。由于细胞株开发是CMC的*步并且占相当部分临床前研究的时间，快速建立一个好的细胞株将有助于药物尽快推进到临床实验阶段。同时由于高产细胞株产生几率很低，筛选一个高产细胞株的过程有如大海捞针，是一个费时费力的过程，如何降低工作量同时保证细胞株产量也是在设计细胞株开发平台需要考虑的问题。
L1210/DDP细胞株开发的*步是把质粒转染进宿主细胞。转染可以用电转或化学转染。转染之后根据载体携带的选择基因在培养基里加抗生素或用GHT-free，Glutamine-free培养基。未有质粒整合的细胞会被杀死。活下来的细胞即成为细胞群。在理想的情况下，每一个细胞都有携带目标基因和选择基因的质粒整合，也都应该有目标基因的表达。实际上细胞群里的细胞表达量高低不一，很多甚至没有目标基因都表达。其原因有多方面包括目标基因的丢失或沉默。低表达或无表达的细胞往往生长较快，经过一段时间的培养以后便会“劣币驱逐良币”，细胞群的表达量会快速下降。一个解决办法改进载体的设计使目标基因和选择基因紧密偶联比如使用IRES。另一个办法是在载体上加入抗沉默的序列比如insulator, UCOE，MAR, EASE等。还有一个办法是做mini pool，即在转染以后把细胞分到96/384孔板里进行选择。由于在96/384孔板里高表达慢生长的细胞与低表达快生长的细胞共存于一孔的机会大大降低，使得这些高表达的细胞有机会成长起来。做mini pool需要在转染后尽快铺板，一般在一两天之内，时间太长则容易同质化而失去做mini pool的意义。Mini pool的主要缺点是工作量大大增加，时间也要延迟。
一个好的L1210/DDP细胞株有多方面要求：
1.产量高，高的产量直接降低固定投资和单次生产成本。
2.产品质量符合要求。产品质量影响药效和安全性。
3.稳定性。产量和质量在生产传代过程中不应有大的改变。一般认为在60-90PDL产量变化不超过30%是可以接受的。
4.与生产过程的相容性。细胞株需要适合大规模生产放大。
5.合规。细胞株的构建过程应避免接触或使用动物来源成分或其它可能影响安全性的成分， 保证单克隆性（clonality）以及整个过程的实验记录完整。
做为一个细胞株开发平台，不仅仅需要能够开发出好的生产用高产细胞株，设计一个好的流程也很重要。
一个好的L1210/DDP细胞株开发平台需要满足：
1.可有效产生高产细胞株。
2.能够快速获得细胞株以缩短CMC时间，加快药物上临床的时间。
3.能够快速获得足量的重组蛋白以进行生产可行性研究及药物体内体外实验。
4.降低工作量。一方面降低人力成本，另一方面也降低人为操作失误的可能性。
建一个好的细胞株重要，如何建好的细胞株同样重要。由于细胞株开发是CMC的*步并且占相当部分临床前研究的时间，快速建立一个好的细胞株将有助于药物尽快推进到临床实验阶段。同时由于高产细胞株产生几率很低，筛选一个高产细胞株的过程有如大海捞针，是一个费时费力的过程，如何降低工作量同时保证细胞株产量也是在设计细胞株开发平台需要考虑的问题。
L1210/DDP细胞株开发的*步是把质粒转染进宿主细胞。转染可以用电转或化学转染。转染之后根据载体携带的选择基因在培养基里加抗生素或用GHT-free，Glutamine-free培养基。未有质粒整合的细胞会被杀死。活下来的细胞即成为细胞群。在理想的情况下，每一个细胞都有携带目标基因和选择基因的质粒整合，也都应该有目标基因的表达。实际上细胞群里的细胞表达量高低不一，很多甚至没有目标基因都表达。其原因有多方面包括目标基因的丢失或沉默。低表达或无表达的细胞往往生长较快，经过一段时间的培养以后便会“劣币驱逐良币”，细胞群的表达量会快速下降。一个解决办法改进载体的设计使目标基因和选择基因紧密偶联比如使用IRES。另一个办法是在载体上加入抗沉默的序列比如insulator, UCOE，MAR, EASE等。还有一个办法是做mini pool，即在转染以后把细胞分到96/384孔板里进行选择。由于在96/384孔板里高表达慢生长的细胞与低表达快生长的细胞共存于一孔的机会大大降低，使得这些高表达的细胞有机会成长起来。做mini pool需要在转染后尽快铺板，一般在一两天之内，时间太长则容易同质化而失去做mini pool的意义。Mini pool的主要缺点是工作量大大增加，时间也要延迟。
